在實際篩選時,主要從血清外觀和實驗操作時細胞的生長狀態(tài)進行。
從外觀上:
1. 顏色:
根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,這個指標的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴謹規(guī)范程度。胎牛血清或多或少總有點溶血,因為胎牛血清凝血功能差,紅細胞容易破裂;
2. 澄清度:
高質(zhì)量的胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡;
3. 血清沉淀:
血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生,對血清質(zhì)量沒有影響,沉淀的產(chǎn)生原因跟加工生產(chǎn)方式、是否反復(fù)凍融密切相關(guān),在實驗操作中可能會對細胞觀察產(chǎn)生影響。
從性能上:
1. 細胞形態(tài),在進行血清篩選時首先觀察細胞的生長形態(tài)是否產(chǎn)生明顯變化,以及觀察貼壁細胞的貼壁情況,細胞在不同血清培養(yǎng)中可能會出現(xiàn)形態(tài)上的差異;
2. 倍增時間,一般情況下會選擇倍增時間短的血清,值得注意的是血清的影響會傳至5代,在進行測試時,最好培養(yǎng)五代后進行計倍增時間的計算;
3. 克隆形成率,測試時一般選50、100、200個細胞進行平板克隆測試,平均5d左右換一次液,兩周后染色計數(shù),對比克隆形成情況。
血清的質(zhì)量,種類及使用的濃度都有可能影響細胞的生長,而不同批次的血清支持細胞生長的能力也不同,尤其是對克隆細胞的生長,某些批次血清可能含有毒性或抑制細胞生長的物質(zhì)。因此,在購買大量血清之前,必須對血清支持細胞生長能力進行檢測,然后再大量購買質(zhì)量好的同一批號的血清。